Ang Javascript sa pagkakaron gi-disable sa imong browser.Kung ang javascript gi-disable, ang pipila nga mga gimbuhaton sa kini nga website dili molihok.
Javier Fidalgo, * Pierre-Antoine Deglesne, * Rodrigo Arroyo, * Lilian Sepúlveda, * Evgeniya Ranneva, Philippe Deprez Department of Science, Skin Tech Pharma Group, Castello D'Empúries, Catalonia, Spain * Kini nga mga tagsulat adunay pipila ka mga panabut sa kini nga trabaho nga Equal background sa kontribusyon: Ang hyaluronic acid (HA) usa ka natural nga polysaccharide nga gigamit sa paghimo sa mga dermal filler alang sa aesthetic nga katuyoan.Tungod kay kini adunay katunga sa kinabuhi sa pipila ka mga adlaw sa mga tisyu sa tawo, ang HA-based nga dermal fillers kay kemikal nga giusab aron mapalugway ang ilang kinabuhi sa lawas.Ang labing kasagaran nga pagbag-o sa komersyal nga HA-based fillers mao ang paggamit sa 1,4-butanediol diglycidyl ether (BDDE) isip usa ka ahente sa crosslinking sa crosslink sa mga kadena sa HA.Ang nahabilin o wala'y reaksyon nga BDDE gikonsiderar nga dili makahilo sa <2 ka bahin matag milyon (ppm);busa, ang nahabilin nga BDDE sa katapusan nga dermal filler kinahanglan nga masukod aron masiguro ang kaluwasan sa pasyente.Mga materyales ug pamaagi: Kini nga pagtuon naghulagway sa pag-ila ug kinaiya sa usa ka by-product sa cross-linking reaction tali sa BDDE ug HA ubos sa alkaline nga kondisyon pinaagi sa paghiusa sa liquid chromatography ug mass spectrometry (LC-MS).Mga Resulta: Human sa lain-laing mga pag-analisar, nakita nga ang alkaline nga mga kondisyon ug taas nga temperatura nga gigamit sa pagdisinfect sa HA-BDDE hydrogel nagpasiugda sa pagporma niining bag-ong by-product, ang "propylene glycol-like" compound.Gipamatud-an sa pagtuki sa LC-MS nga ang by-product adunay parehas nga monoisotopic mass sama sa BDDE, lahi nga retention time (tR), ug lain nga UV absorbance (λ=200 nm) mode.Dili sama sa BDDE, naobserbahan sa LC-MS analysis nga ubos sa parehas nga mga kondisyon sa pagsukod, kini nga by-product adunay mas taas nga detection rate sa 200 nm.Panapos: Kini nga mga resulta nagpakita nga walay epoxide sa istruktura niining bag-ong compound.Bukas ang diskusyon aron mahibal-an ang peligro sa bag-ong produkto nga nakit-an sa paghimo sa HA-BDDE hydrogel (HA dermal filler) alang sa komersyal nga katuyoan.Mga keyword: hyaluronic acid, HA dermal filler, cross-linked hyaluronic acid, BDDE, LC-MS analysis, BDDE by-product.
Ang mga filler nga gibase sa hyaluronic acid (HA) mao ang labing kasagaran ug popular nga mga dermal filler nga gigamit alang sa mga katuyoan sa kosmetiko.1 Kini nga dermal filler usa ka hydrogel, kasagaran gilangkuban sa> 95% nga tubig ug 0.5-3% HA, nga naghatag kanila usa ka istruktura nga sama sa gel.Ang 2 HA usa ka polysaccharide ug ang nag-unang sangkap sa extracellular matrix sa mga vertebrates.Usa sa mga sangkap.Naglangkob kini sa (1,4) -glucuronic acid-β (1,3) -N-acetylglucosamine (GlcNAc) nga nagbalikbalik nga disaccharide nga mga yunit nga konektado sa glycosidic bonds.Kining disaccharide pattern parehas sa tanang organismo.Kung itandi sa pipila ka mga filler nga nakabase sa protina (sama sa collagen), kini nga kabtangan naghimo sa HA nga usa ka labi ka biocompatible nga molekula.Kini nga mga filler mahimong magpakita sa pagkasunod-sunod sa amino acid nga piho nga mahimong mailhan sa immune system sa pasyente.
Kung gigamit ingon usa ka dermal filler, ang panguna nga limitasyon sa HA mao ang paspas nga pagbalhin sa sulod sa mga tisyu tungod sa presensya sa usa ka piho nga pamilya sa mga enzyme nga gitawag hyaluronidases.Sa pagkakaron, daghang mga kemikal nga pagbag-o sa istruktura sa HA ang gihulagway aron madugangan ang katunga sa kinabuhi sa HA sa mga tisyu.3 Kadaghanan niini nga mga kausaban misulay sa pagpakunhod sa access sa hyaluronidase ngadto sa polysaccharide polymers pinaagi sa cross-linking HA chains.Busa, tungod sa pagkaporma sa mga tulay ug sa intermolecular covalent bonds tali sa HA structure ug sa cross-linking agent, ang cross-linked HA hydrogel og mas daghang anti-enzyme degradation nga mga produkto kay sa natural nga HA.4-6
Sa pagkakaron, ang kemikal nga crosslinking agent nga gigamit sa pagprodyus og crosslinked HA naglakip sa methacrylamide, 7 hydrazide, 8 carbodiimide, 9 divinyl sulfone, 1,4-butanediol diglycidyl ether (BDDE) Ug poly(ethylene glycol) diglycidyl ether.Ang 10,11 BDDE sa pagkakaron mao ang labing kasagarang gigamit nga ahente sa crosslinking.Bisan tuod kini nga mga matang sa hydrogels napamatud-an nga luwas sulod sa mga dekada, ang mga crosslinking agent nga gigamit mao ang mga reactive reagents nga mahimong cytotoxic ug, sa pipila ka mga kaso, mutagenic.12 Busa, kinahanglan nga taas ang ilang nahabilin nga sulud sa katapusan nga hydrogel.Ang BDDE gikonsiderar nga luwas kung ang nahabilin nga konsentrasyon dili moubos sa 2 ka bahin matag milyon (ppm).4
Adunay ubay-ubay nga mga pamaagi sa pag-ila sa ubos nga residue nga konsentrasyon sa BDDE, cross-linking degree ug substitution position sa HA hydrogels, sama sa gas chromatography, size exclusion chromatography inubanan sa mass spectrometry (MS), nuclear magnetic resonance (NMR) nga mga pamaagi sa pagsukod sa fluorescence, ug Diode array inubanan sa high performance liquid chromatography (HPLC).13-17 Kini nga pagtuon naghulagway sa pagkakita ug kinaiya sa usa ka by-product sa katapusang cross-linked HA hydrogel nga gihimo sa reaksyon sa BDDE ug HA ubos sa alkaline nga kondisyon.HPLC ug liquid chromatography-mass spectrometry (LC-MS analysis).Tungod kay ang toxicity niini nga by-product sa BDDE wala mahibal-i, among girekomenda nga ang nahabilin nga quantification niini kinahanglan nga matino sa parehas nga paagi sa pamaagi nga sagad gihimo sa BDDE sa katapusan nga produkto.
Ang nakuha nga sodium salt sa HA (Shiseido Co., Ltd., Tokyo, Japan) adunay molecular weight nga ~1,368,000 Da (Laurent method) 18 ug intrinsic viscosity nga 2.20 m3/kg.Alang sa crosslinking reaction, ang BDDE (≥95%) gipalit gikan sa Sigma-Aldrich Co. (St. Louis, MO, USA).Ang Phosphate buffered saline nga adunay pH 7.4 gipalit gikan sa Sigma-Aldrich Company.Ang tanang solvents, acetonitrile ug tubig nga gigamit sa LC-MS analysis gipalit gikan sa HPLC grade quality.Ang formic acid (98%) gipalit isip reagent grade.
Ang tanan nga mga eksperimento gihimo sa usa ka UPLC Acquity system (Waters, Milford, MA, USA) ug konektado sa API 3000 triple quadrupole mass spectrometer nga nasangkapan sa usa ka electrospray ionization source (AB SCIEX, Framingham, MA, USA).
Ang synthesis sa cross-linked HA hydrogels gisugdan pinaagi sa pagdugang sa 198 mg sa BDDE ngadto sa 10% (w/w) sodium hyaluronate (NaHA) nga solusyon sa presensya sa 1% alkali (sodium hydroxide, NaOH).Ang katapusang konsentrasyon sa BDDE sa reaksyon nga timpla mao ang 9.9 mg/mL (0.049 mM).Dayon, ang sagol nga reaksyon hingpit nga gisagol ug homogenized ug gitugotan nga magpadayon sa 45 ° C sulod sa 4 ka oras.19 Ang pH sa reaksyon gipabilin sa ~12.
Pagkahuman, ang reaksyon nga timpla gihugasan sa tubig, ug ang katapusan nga HA-BDDE hydrogel gisala ug lasaw sa PBS buffer aron makab-ot ang usa ka konsentrasyon sa HA nga 10 ngadto sa 25 mg / mL, ug usa ka katapusang pH nga 7.4.Aron ma-sterilize ang gihimo nga cross-linked HA hydrogels, kining tanan nga mga hydrogel kay autoclaved (120°C sulod sa 20 minutos).Ang giputli nga BDDE-HA hydrogel gitipigan sa 4 ° C hangtod sa pag-analisar.
Sa pag-analisar sa BDDE nga anaa sa cross-linked nga produkto sa HA, usa ka 240 mg nga sample ang gitimbang ug gipasulod ngadto sa center hole (Microcon®; Merck Millipore, Billerica, MA, USA; volume 0.5 mL) ug gi-centrifuged sa 10,000 rpm sa temperatura sa lawak 10 minutos.Usa ka kinatibuk-an nga 20 µL nga pull-down nga likido ang nakolekta ug gisusi.
Aron ma-analisar ang BDDE standard (Sigma-Aldrich Co) ubos sa alkaline nga kondisyon (1%, 0.1% ug 0.01% NaOH), kung ang mosunod nga mga kondisyon matuman, ang liquid sample mao ang 1:10, 1:100, o hangtod sa 1:1,000,000 Kung gikinahanglan, gamita ang MilliQ deionized nga tubig para sa pagtuki.
Alang sa pagsugod nga mga materyales nga gigamit sa cross-linking nga reaksyon (HA 2%, H2O, 1% NaOH, ug 0.049 mM BDDE), 1 mL sa matag sample nga giandam gikan niini nga mga materyales gisusi gamit ang parehas nga mga kondisyon sa pag-analisar.
Aron mahibal-an ang espesipiko sa mga taluktok nga makita sa mapa sa ion, 10 µL sa 100 ppb BDDE standard solution (Sigma-Aldrich Co) gidugang sa 20 µL sample.Sa kini nga kaso, ang katapusan nga konsentrasyon sa sumbanan sa matag sample mao ang 37 ppb.
Una, pag-andam og BDDE stock solution nga adunay konsentrasyon nga 11,000 mg/L (11,000 ppm) pinaagi sa pagtunaw sa 10 μL sa standard BDDE (Sigma-Aldrich Co) nga adunay 990 μL MilliQ nga tubig (densidad 1.1 g/mL).Gamita kini nga solusyon sa pag-andam ug 110 µg/L (110 ppb) BDDE nga solusyon isip intermediate standard dilution.Dayon, gamita ang intermediate BDDE standard diluent (110 ppb) aron maandam ang standard curve pinaagi sa pagtunaw sa intermediate diluent sa makadaghang higayon aron makab-ot ang gitinguha nga konsentrasyon nga 75, 50, 25, 10, ug 1 ppb.Ingon sa gipakita sa Figure 1, nakit-an nga ang BDDE standard curve gikan sa 1.1 hangtod 110 ppb adunay maayo nga linearity (R2> 0.99).Ang standard curve gisubli sa upat ka independenteng mga eksperimento.
Figure 1 BDDE standard calibration curve nga nakuha sa LC-MS analysis, diin usa ka maayo nga correlation ang nakita (R2> 0.99).
Minubo: BDDE, 1,4-butanediol diglycidyl ether;LC-MS, liquid chromatography ug mass spectrometry.
Aron mailhan ug maihap ang mga sumbanan sa BDDE nga naa sa cross-linked nga HA ug ang mga sumbanan sa BDDE sa base nga solusyon, gigamit ang pagtuki sa LC-MS.
Ang chromatographic separation nakab-ot sa LUNA 2.5 µm C18(2)-HST column (50×2.0 mm2; Phenomenex, Torrance, CA, USA) ug gitipigan sa room temperature (25°C) atol sa pagtuki.Ang mobile phase naglangkob sa acetonitrile (solvent A) ug tubig (solvent B) nga adunay 0.1% formic acid.Ang mobile phase giwagtang pinaagi sa gradient elution.Ang gradient mao ang mosunod: 0 minutos, 2% A;1 ka minuto, 2% A;6 minutos, 98% A;7 minutos, 98% A;7.1 minutos, 2% A;10 minuto , 2% A. Ang oras sa pagdagan 10 minuto ug ang gidaghanon sa indeyksiyon mao ang 20 µL.Ang oras sa pagpadayon sa BDDE mga 3.48 minuto (gikan sa 3.43 hangtod 4.14 minuto base sa mga eksperimento).Ang mobile phase gibomba sa usa ka flow rate nga 0.25 mL/min para sa LC-MS analysis.
Para sa BDDE analysis ug quantification ni MS, ang UPLC system (Waters) gikombinar sa API 3000 triple quadrupole mass spectrometer (AB SCIEX) nga adunay electrospray ionization source, ug ang analysis gihimo sa positive ion mode (ESI+).
Sumala sa pag-analisar sa fragment sa ion nga gihimo sa BDDE, ang fragment nga adunay pinakataas nga intensity gitino nga ang fragment nga katumbas sa 129.1 Da (Figure 6).Busa, sa multi-ion monitoring mode (MIM) alang sa quantification, ang mass conversion (mass-to-charge ratio [m / z]) sa BDDE mao ang 203.3 / 129.1 Da.Gigamit usab niini ang full scan (FS) mode ug product ion scan (PIS) mode para sa LC-MS analysis.
Aron mapamatud-an ang espesipiko sa pamaagi, usa ka blangko nga sample (inisyal nga bahin sa mobile) ang gisusi.Walay signal nga nakit-an sa blangko nga sample nga adunay mass conversion nga 203.3 / 129.1 Da.Mahitungod sa repeatability sa eksperimento, ang 10 standard injections sa 55 ppb (sa tunga-tunga sa calibration curve) gisusi, nga miresulta sa usa ka residual standard deviation (RSD) <5% (data nga wala gipakita).
Ang nahabilin nga sulud sa BDDE gi-quantified sa walo ka lainlaing autoclaved BDDE cross-linked HA hydrogels, nga katumbas sa upat ka independente nga mga eksperimento.Sama sa gihulagway sa seksyon nga "Mga Materyal ug Pamaagi", ang pag-ihap gisusi sa kasagaran nga kantidad sa regression curve sa BDDE standard dilution, nga katumbas sa talagsaon nga peak nga nakit-an sa BDDE mass transition sa 203.3 / 129.1 Da, nga adunay retensyon. oras nga 3.43 hangtod 4.14 ka minuto Wala maghulat.Ang Figure 2 nagpakita sa usa ka pananglitan nga chromatogram sa 10 ppb BDDE reference standard.Ang talaan 1 nagsumaryo sa nahabilin nga sulud sa BDDE sa walo ka lainlaing mga hydrogel.Ang kantidad sa kantidad mao ang 1 hangtod 2.46 ppb.Busa, ang nahabilin nga konsentrasyon sa BDDE sa sample madawat alang sa paggamit sa tawo (<2 ppm).
Figure 2 Ion chromatogram sa 10 ppb BDDE reference standard (Sigma-Aldrich Co), MS (m / z) transisyon nga nakuha sa LC-MS analysis sa 203.30 / 129.10 Da (sa positibo nga MRM mode).
Minubo: BDDE, 1,4-butanediol diglycidyl ether;LC-MS, liquid chromatography ug mass spectrometry;MRM, daghang pagmonitor sa reaksyon;MS, masa;m/z, mass-to-charge ratio.
Mubo nga sulat: Ang mga sample 1-8 kay autoclaved BDDE cross-linked HA hydrogels.Ang nahabilin nga kantidad sa BDDE sa hydrogel ug ang peak sa oras sa pagpadayon sa BDDE gitaho usab.Sa katapusan, gitaho usab ang paglungtad sa bag-ong mga taluktok nga adunay lainlaing mga oras sa pagpadayon.
Minubo: BDDE, 1,4-butanediol diglycidyl ether;HA, hyaluronic acid;MRM, daghang pagmonitor sa reaksyon;tR, panahon sa pagpabilin;LC-MS, liquid chromatography ug mass spectrometry;RRT, relatibong retention time.
Katingad-an, ang pag-analisar sa LC-MS ion chromatogram nagpakita nga base sa tanan nga autoclaved cross-linked HA hydrogel samples nga gi-analisar, adunay usa ka dugang nga peak sa mas mubo nga oras sa pagpabilin sa 2.73 ngadto sa 3.29 ka minuto.Pananglitan, ang Figure 3 nagpakita sa ion chromatogram sa usa ka cross-linked nga sample sa HA, diin ang usa ka dugang nga peak makita sa lain nga retention time nga gibana-bana nga 2.71 ka minuto.Ang naobserbahan nga relative retention time (RRT) tali sa bag-ong naobserbahan nga peak ug ang peak gikan sa BDDE nakit-an nga 0.79 (Table 1).Tungod kay nahibal-an namon nga ang bag-ong naobserbahan nga taluktok dili kaayo gipabilin sa kolum sa C18 nga gigamit sa pagtuki sa LC-MS, ang bag-ong peak mahimong katumbas sa usa ka labi nga polar compound kaysa BDDE.
Figure 3 Ion chromatogram sa cross-linked HA hydrogel sample nga nakuha sa LC-MS (MRM mass conversion 203.3/129.0 Da).
Minubo: HA, hyaluronic acid;LC-MS, liquid chromatography ug mass spectrometry;MRM, daghang pagmonitor sa reaksyon;RRT, relatibong retention time;tR, panahon sa pagpabilin.
Aron isalikway ang posibilidad nga ang bag-ong mga taluktok nga naobserbahan mahimong mga kontaminante nga orihinal nga naa sa hilaw nga materyales nga gigamit, kini nga mga hilaw nga materyales gisusi usab gamit ang parehas nga pamaagi sa pagtuki sa LC-MS.Ang mga panugod nga materyales nga gisusi naglakip sa tubig, 2% NaHA sa tubig, 1% NaOH sa tubig, ug BDDE sa samang konsentrasyon nga gigamit sa cross-linking reaction.Ang ion chromatogram sa gigamit nga materyal wala magpakita sa bisan unsang compound o peak, ug ang oras sa pagpabilin niini katumbas sa bag-ong peak nga naobserbahan.Kini nga kamatuoran nagsalikway sa ideya nga dili lamang ang sinugdanan nga materyal mahimong adunay bisan unsang mga compound o mga substansiya nga mahimong makabalda sa pamaagi sa pag-analisa, apan walay timailhan sa posibleng cross-contamination sa ubang mga produkto sa laboratoryo.Ang mga kantidad sa konsentrasyon nga nakuha pagkahuman sa pag-analisar sa LC-MS sa BDDE ug bag-ong mga taluktok gipakita sa Talaan 2 (mga sample 1-4) ug ang chromatogram sa ion sa Figure 4.
Mubo nga sulat: Ang mga sample 1-4 katumbas sa hilaw nga materyales nga gigamit sa pagprodyus og autoclaved BDDE cross-linked HA hydrogels.Kini nga mga sample wala gi-autoclave.
Minubo: BDDE, 1,4-butanediol diglycidyl ether;HA, hyaluronic acid;LC-MS, liquid chromatography ug mass spectrometry;MRM, multiple reaction monitoring.
Ang Figure 4 katumbas sa LC-MS chromatogram sa usa ka sample sa hilaw nga materyal nga gigamit sa cross-linking reaksyon sa HA ug BDDE.
Mubo nga sulat: Tanan kini gisukod sa parehas nga konsentrasyon ug ratio nga gigamit sa paghimo sa cross-linking nga reaksyon.Ang mga numero alang sa hilaw nga materyales nga gisusi sa chromatogram katumbas sa: (1) tubig, (2) 2% HA tubigon nga solusyon, (3) 1% NaOH tubigon nga solusyon.Ang pagtuki sa LC-MS gihimo alang sa mass conversion nga 203.30/129.10 Da (sa positibo nga MRM mode).
Minubo: BDDE, 1,4-butanediol diglycidyl ether;HA, hyaluronic acid;LC-MS, liquid chromatography ug mass spectrometry;MRM, multiple reaction monitoring.
Ang mga kondisyon nga mitultol sa pagporma sa bag-ong mga taluktok gitun-an.Aron matun-an kung giunsa ang mga kondisyon sa reaksyon nga gigamit sa paghimo sa cross-linked HA hydrogel makaapekto sa reaktibiti sa BDDE cross-linking agent, nga misangpot sa pagporma sa bag-ong mga taluktok (posible nga mga produkto), lain-laing mga pagsukod ang gihimo.Niini nga mga determinasyon, among gitun-an ug gi-analisar ang katapusang BDDE crosslinker, nga gitambalan sa lain-laing mga konsentrasyon sa NaOH (0%, 1%, 0.1%, ug 0.01%) sa usa ka aqueous medium, gisundan o walay autoclaving.Ang pamaagi sa bakterya sa pagsundog sa parehas nga mga kondisyon parehas sa pamaagi nga gigamit sa paghimo sa cross-linked HA hydrogel.Sama sa gihulagway sa seksyon nga "Mga Materyal ug Pamaagi", ang mass transition sa sample gisusi sa LC-MS ngadto sa 203.30 / 129.10 Da.Ang BDDE ug ang konsentrasyon sa bag-ong peak gikalkulo, ug ang mga resulta gipakita sa Table 3. Walay bag-ong mga peak ang nakita sa mga sample nga wala autoclaved, bisan unsa pa ang presensya sa NaOH sa solusyon (mga sample 1-4, Table 3).Alang sa mga autoclaved sample, ang mga bag-ong peak makita lamang sa presensya sa NaOH sa solusyon, ug ang pagporma sa peak daw nagdepende sa konsentrasyon sa NaOH sa solusyon (mga sample 5-8, Table 3) (RRT = 0.79).Ang Figure 5 nagpakita sa usa ka pananglitan sa usa ka ion chromatogram, nga nagpakita sa duha ka autoclaved sample sa presensya o pagkawala sa NAOH.
Minubo: BDDE, 1,4-butanediol diglycidyl ether;LC-MS, liquid chromatography ug mass spectrometry;MRM, multiple reaction monitoring.
Mubo nga sulat: Ang ibabaw nga chromatogram: Ang sample gitambalan sa 0.1% NaOH aqueous solution ug autoclaved (120°C sulod sa 20 minutos).Ubos nga chromatogram: Ang sample wala gitagad sa NaOH, apan gi-autoclave ubos sa parehas nga mga kondisyon.Ang mass conversion sa 203.30 / 129.10 Da (sa positibo nga MRM mode) gisusi sa LC-MS.
Minubo: BDDE, 1,4-butanediol diglycidyl ether;LC-MS, liquid chromatography ug mass spectrometry;MRM, multiple reaction monitoring.
Sa tanan nga mga autoclaved sample, nga adunay o wala ang NaOH, ang konsentrasyon sa BDDE mikunhod pag-ayo (hangtod sa 16.6 ka beses) (mga sample 5-8, Table 2).Ang pagkunhod sa konsentrasyon sa BDDE mahimong tungod sa kamatuoran nga sa taas nga temperatura, ang tubig mahimong molihok isip base (nucleophile) aron maablihan ang epoxide ring sa BDDE aron mahimong usa ka 1,2-diol compound.Ang monoisotopic nga kalidad niini nga compound lahi sa BDDE ug busa dili maapektuhan.Ang LC-MS nakamatikod sa usa ka mass shift nga 203.30/129.10 Da.
Sa katapusan, kini nga mga eksperimento nagpakita nga ang henerasyon sa bag-ong mga taluktok nagdepende sa presensya sa BDDE, NAOH, ug ang proseso sa autoclaving, apan walay kalabotan sa HA.
Ang bag-ong peak nga nakit-an sa usa ka oras sa pagpabilin nga gibana-bana nga 2.71 ka minuto nga gihulagway sa LC-MS.Alang niini nga katuyoan, ang BDDE (9.9 mg/mL) gilumlom sa usa ka 1% nga NaOH nga tubigon nga solusyon ug gi-autoclave.Sa Table 4, ang mga kinaiya sa bag-ong peak gitandi sa nahibal-an nga BDDE reference peak (retention time nga gibana-bana nga 3.47 minutos).Base sa pag-analisar sa fragmentation sa ion sa duha ka mga taluktok, mahimong makahinapos nga ang peak nga adunay retention time nga 2.72 minutos nagpakita sa sama nga mga tipik sa BDDE peak, apan adunay lain-laing mga intensity (Figure 6).Alang sa peak nga katumbas sa retention time (PIS) nga 2.72 minuto, usa ka mas grabe nga peak ang naobserbahan pagkahuman sa pagkabahin sa usa ka masa nga 147 Da.Sa konsentrasyon sa BDDE (9.9 mg / mL) nga gigamit niini nga determinasyon, ang lain-laing mga absorbance modes (UV, λ = 200 nm) sa ultraviolet spectrum naobserbahan usab human sa chromatographic separation (Figure 7).Ang peak nga adunay retention time nga 2.71 ka minuto makita gihapon sa 200 nm, samtang ang BDDE peak dili maobserbahan sa chromatogram ubos sa parehas nga kondisyon.
Talaan 4 Mga resulta sa kinaiya sa bag-ong peak nga adunay retention time nga mga 2.71 ka minuto ug ang BDDE peak nga adunay retention time nga 3.47 ka minuto
Hinumdomi: Aron makuha kini nga mga resulta, ang LC-MS ug HPLC nga pag-analisar (MRM ug PIS) gihimo sa duha ka mga taluktok.Alang sa pagtuki sa HPLC, gigamit ang UV detection nga adunay wavelength nga 200 nm.
Minubo: BDDE, 1,4-butanediol diglycidyl ether;HPLC, high performance liquid chromatography;LC-MS, liquid chromatography ug mass spectrometry;MRM, daghang pagmonitor sa reaksyon;m/z, mass-to-charge ratio;PIS, product Ion scanning;ultraviolet nga kahayag, ultraviolet nga kahayag.
Mubo nga sulat: Ang mga tipik sa masa makuha pinaagi sa LC-MS analysis (PIS).Top chromatogram: mass spectrum sa BDDE standard sample fragment.Ubos nga chromatogram: Ang mass spectrum sa bag-ong peak detected (RRT nga nalangkit sa BDDE peak kay 0.79).Ang BDDE giproseso sa 1% nga solusyon sa NaOH ug gi-autoclave.
Minubo: BDDE, 1,4-butanediol diglycidyl ether;LC-MS, liquid chromatography ug mass spectrometry;MRM, daghang pagmonitor sa reaksyon;PIS, product ion scan;RRT, relatibong retention time.
Figure 7 Ion chromatogram sa 203.30 Da precursor ion, ug (A) ang bag-ong peak uban sa usa ka paghawid sa panahon sa 2.71 minutos ug (B) ang UV detection sa BDDE reference standard peak sa 3.46 minutos sa 200 nm.
Sa tanan nga mga cross-linked HA hydrogels nga gihimo, naobserbahan nga ang nahabilin nga konsentrasyon sa BDDE pagkahuman sa LC-MS quantification mao ang <2 ppm, apan usa ka bag-ong wala mailhi nga peak ang nagpakita sa pag-analisar.Kining bag-ong peak dili motakdo sa BDDE standard nga produkto.Ang BDDE standard nga produkto nakaagi usab sa samang kalidad nga pagkakabig (MRM conversion 203.30/129.10 Da) nga pagtuki sa positibong MRM mode.Kasagaran, ang ubang mga pamaagi sa analitikal sama sa chromatography gigamit ingon mga pagsulay sa limitasyon aron makit-an ang BDDE sa mga hydrogel, apan ang labing kataas nga limitasyon sa pagtuki (LOD) gamay ra sa 2 ppm.Sa laing bahin, hangtod karon, ang NMR ug MS gigamit sa pag-ila sa lebel sa cross-linking ug/o pagbag-o sa HA sa mga tipik sa sugar unit sa cross-linked nga mga produkto sa HA.Ang katuyoan sa kini nga mga pamaagi dili mao ang pag-ihap sa nahabilin nga pagkakita sa BDDE sa ingon ka ubos nga konsentrasyon sama sa among gihulagway sa kini nga artikulo (LOD sa among pamaagi sa LC-MS = 10 ppb).
Oras sa pag-post: Sep-01-2021